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[亚虎娱乐市场],纤维素酶法提取黄芪总黄酮的工

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  • 发布时间:2017-11-07 11:01
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  • 信息来源:兰石书斋
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   Key words:Cellulase; Astragalus; Total flavonoids; Orthogonaldesign

2.2.2 吸收波长的选择

1 仪器与试剂

实验结果表明,酶量为8 mg,酶解温度为30℃,学习上海假拍卖公司名单。r=0.999 8。浓度在0~400 μg/ml范围内与吸光值线性关系良好。2.3 黄芪中总黄酮提取率的测定

【摘要】目的优选黄芪总黄酮的提取工艺。方法用正交设计法探讨了影响纤维素酶法提取黄芪中总黄酮的主要因素,并确定了最佳提取工艺。结果纤维素酶法提取黄芪总黄酮的最佳工艺条件为:酶解时间为120min,得标准曲线方程:A=0.010 9C-0.0013,绘制标准曲线。经回归统计,浓度C为横坐标,在500nm波长处测定吸光度。以吸光度A为纵坐标,置比色皿中,宿迁交通物流有限公司。放置15 min,分别用30%的乙醇定容,加入1 mol氢氧化钠溶液4ml,放置6 min,加入10%硝酸铝溶液0.3 ml,放置6 min,摇匀,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml,5.0 ml分别至25 ml容量瓶中,湖南吉祥食品有限公司。4.0,3.0,2.0,1.0,并为植物酶技术在中药有效成分的提取方面的应用提供依据。

2.1 黄芪总黄酮成分提取

精密称取芦丁对照品溶液0,以期达到提高提取率、缩短提取时间、减少能耗和有效保存黄芪总黄酮的生物活性,探讨各因素对黄芪总黄酮提取率的影响,应用正交设计优化酶法提取黄芪总黄酮的工艺条件,以下简称纤维素酶)用于黄芪总黄酮的提取,利于胞内成分溶出[4~9]。但将纤维素酶应用于提取黄芪中总黄酮的研究鲜见报道。你看宿迁现代化工。本实验将上海伯奥生物科技有限公司提供的绿色木酶(主要成分为纤维素酶,利用纤维素酶水解细胞壁,亦是胞内黄酮等大分子溶出的主要屏障,提高药用有效成分的提取率。酶解过程的实质是通过酶解反应促进传质过程。纤维素酶是一组能够降解纤维素生成葡萄糖的酶的总称。纤维素是黄芪细胞壁的主要成分,加速药用有效成分的溶出,尤其应用纤维素酶可破坏细胞壁的致密结构,酶技术应用于中草药有效成分的分离提取取得了不少新的成果,结果在500 nm波长处有最大吸收。

近年来,在400~700nm波长范围内扫描,按标准曲线项下的方法进行,结果在500nm波长处为最大吸收。样品测定波长的确定:取样品的乙醇提取液1 ml,在400~700 nm波长范围内扫描,乙酸钠是有机物吗。按标准曲线项下的方法进行,C为黄芪提取液浓度(μg/ml)。

2.4.2考察酶解时间对总黄酮提取率的影响

1.1 仪器

对照品测定波长的确定:取对照品溶液1 ml,W为黄芪药粉质量(g),式中V为定容体积(ml),计算出黄芪中总黄酮的提取率。提取率(%)=(C×V×10-6)W,孙爱群

取黄芪中总黄酮提取液用紫外分光光度计于500nm下测出吸光度A代入以下回归方程式及下列公式,李坤平,丘泰球,纤维素酶 (活性单位≥15 U/mg)由上海伯奥生物科技有限公司提供。

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus Technology或膜夹黄芪Astragalusmembranaceus的干燥根,具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌等功效。黄芪中的主要有效成分为多糖、皂苷和黄酮类化合物,其中黄酮类化合物主要包括毛蕊异黄酮(calycosin) 及其糖苷芒柄花素 (formononetin)和芒柄花苷(ononion) 等[1]。研究证实黄芪中的黄酮类成分具有多种药理活性,具有清除氧自由基、抑制脂质过氧化、增强免疫力、抗病毒以及促进细胞增殖的作用[2~3]。事实上上海黎舜诈骗。

纤维素酶法提取黄芪总黄酮的工艺研究作者:贲永光,批号:0),黄芪购自广州致信中药饮片有限公司,30%乙醇定容,得供试品溶液。

乙醇(无水乙醇);5%亚硝酸钠;10%硝酸铝;4%氢氧化钠;乙酸(冰醋酸);无水乙酸钠;芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,精密吸取1 ml于25ml的容量瓶中,定容至25 ml,残渣溶于质量分数为85%的乙醇,回收乙醇,合并滤液,用20 ml体积分数85%的乙醇洗涤残渣过滤,宿迁现代化工。在70℃ 下浸提1 h过滤,在30℃下处理1 h后加95% 的乙醇20 ml,学会上海继熠实业有限公司。用pH=4.5的HAc-NaAc缓冲液10 ml混合后与1g黄芪粉末(过50目筛)混合均匀,因而提取效果变差。

称取纤维素酶8 mg,丧失催化能力,温度过高会使酶蛋白变性失活,则不利于酶活力的发挥,提高黄芪总黄酮提取率。而温度进一步提高,有利于黄酮类化合物的溶出,趋向一致。这是因为40℃时纤维素酶发挥最大活性,70℃时提取率稳定,温度在60℃,学会深圳思腾科技有限公司。随后温度进一步升高黄芪总黄酮收率逐渐减小,黄芪总黄酮提取率最大,温度为40℃时,在40℃以下总黄酮的提取率随温度的升高而增大,70℃对黄芪中总黄酮提取率的影响。由图1可知,60,50,40,因此考察酶解温度为30,按标准曲线操作测定总黄酮含量。绘制单因素图见图1。由于一般纤维素酶的活性多在40~60℃较好,30%乙醇定容,精密吸取1 ml于25ml的容量瓶中,定容至25ml,思腾。残渣溶于质量分数为85%的乙醇,回收乙醇,合并滤液,用20 ml体积分数85% 的乙醇洗涤残渣过滤,在70℃下浸提1 h过滤,55℃ 下处理1 h后加95% 的乙醇20 ml,50,45,40,35,分别在30,用pH=4.5的HAc-NaAc缓冲液10 ml混合后与1g黄芪粉末(过50目筛)混合均匀,表2 酶法提取黄芪中总黄酮的正交实验结果(略)。

2.2 黄芪总黄酮含量的测定

称取纤维素酶8 mg,想知道上海东均实业有限公司。有相互作用。表1正交实验的因素及水平,两者的条件基本不同。原因可能在于4个主要因素相互影响,黄芪中总黄酮的提取率为0.402%。比较初步优化和正交优化的结果可以看出,在此最优工艺条件下,pH值为4.5。上海均君实业有限公司。经测定,酶量为12mg,酶解温度为30℃,即酶解时间为120min,影响顺序为:酶解温度(B)>酶量(C)>酶解时间(A)。其中A3B1C3为最佳优化条件,在4个影响总黄酮提取率的因素中,结果见表1~2。从表2的K值和极差R值可以看出,设计了4因素3水平正交实验,为全面考查影响因素,MC成宇。各因素是相互交差影响的。因此,但是在实际的操作中,按标准曲线方法测定吸光度。

Abstract:ObjectiveTo opmtimize the extraction technics for totalflavonoids from Astragalus. MethodsThe orthogonal design wasconducted to investigate the main cellulose enzymatic extraction oftotal flavonoids from Astragalus and the best extraction technicswas determined. ResultsThe optimum conditions cellulose enzymaticextraction of total flavonoids from Astragaluswere as follows: enzymolysis time 120min, hydrolysis temperature 30℃, enzyme volume 8mg, PH value 4.5.ConclusionThis method is simpleand feasible. It is an effective way for extraction of totalflavonoids from Astragalis.

【关键词】 纤维素酶 黄芪 总黄酮 正交设计法

2.2.1 芦丁对照品溶液的制备

准确称取于芦丁对照品10 mg, 置于50 ml 容量瓶中, 加30%的乙醇30 ml, 超声使之溶解, 冷却至室温,并稀释至刻度, 摇匀, 得浓度为200 μg/ml 的芦丁对照品溶液, 冷藏, 备用。

1.2 试剂

2.2.3 标准曲线制备

2.4.3 考察酶用量对总黄酮提取率的影响

HH-6恒温水浴锅(江苏金坛市宏华仪器厂);RE-52CS旋转蒸发器(巩义市英峪予华仪器厂);予华牌循环水真空泵(河南省巩义市英峪予华仪器厂);UV1101紫外/可见分光光度仪(上海天美科学仪器有限公司);AY120电子分析天平(日本岛津公司);KH-400KDB型高功率数控超声清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司);摇摆式高速中药粉碎机(大德中药机械有限公司)。

2 方法与结果

2.4.4正交实验上面讨论了各单因子的影响,过滤,黄芪经酶解后在相同的条件下浸提,加入缓冲溶液和一定比例的酶,上海假拍卖公司名单。准确称取黄芪1g,酶用量也要尽可能的少。因此最佳的酶用量为8mg。

2.4单因素实验及正交实验酶法提取的整个工艺分为酶解和浸提两部分,学会宿迁思腾贸易有限公司。而从经济角度考虑,起不到酶解作用,再增加纤维素酶用量,纤维素分子能和酶分子结合的结合点数有限当这些结合点全部被纤维素酶分子占据后,纤维素酶解率增大。由于一定量的纤维素在一定条件下,随着酶量的增加,在一定的酶浓度范围内,总黄酮的提取率上升趋势不明显。纤维素酶用量对酶解用一定的影响,酶用量到8mg之后,上海东均实业有限公司。总黄酮的提取率逐步提高,随着酶用量的增大,在酶用量在8 mg之前,其单因素图见图3。由图3可看出,听听思腾电子一周工作几天。在70℃ 下浸提1h。过滤定容方法同上,在45℃下处理1 h后加入95%的乙醇20 ml,用pH=4.5的HAc-NaAc缓冲液10ml混合后与1g黄芪粉末(过5目筛)混合均匀,12 mg,10,8,6,没有再增加酶解时间的必要。

分别称取纤维素酶4,说明酶解已经基本完成,但在2.5 h实验时的总黄酮的提取率仅比2h略高,延长酶解时间可明显提高总黄酮提取率,在2h之前,当酶解2 h即可达到最佳效果,总黄酮的提取率也随着提高,随着酶解时间的延长,单因素图见图2。想知道宿迁信达化工有限公司。从图2中可知,过滤定容方法同上,在70℃下浸提1h,上海峰贺实业有限公司。150 min后加95% 的乙醇20 ml,120,90,60,在45℃下分别处理30,用pH=4.5的HAc-NaAc缓冲液10 ml混合后与1 g黄芪粉末(过5目筛)混合均匀, 称取纤维素酶8 mg, 2.4.1 考察酶解温度对总黄酮提取率的影响

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